Real Time Live Cell interaction monitor - Ligand Tracer

분자 간의 실시간 상호작용 관찰

LigandTracer는 분자 간의 상호작용을 실시간으로 관찰하는 장비로서, 샘플을 넣어주고 덮개를 닫아주는 간단한 과정으로 실험을 진행합니다.

별도의 washing이나 mixing 과정이 필요없습니다. 가장 일반적인 타겟은 살아있는 세포 표면에 발현되어 있는 리셉터입니다. 

실험 조건

• 리간드를 형광 또는 동위원소로 라벨링 할 수 있는 경우
• 타겟을 PetriDish에 고정시킬 수 있는 경우
• 분자 간 상호작용이 ~분에서 ~시간 동안 일어나는 경우

상세 특징

LigandTracer는 실시간으로 분자 간 상호작용을 모니터링합니다.

 

Endpoint를 사용하는 ELISA에서 놓칠 수도 있는 상호작용 특성을 빠짐없이 모니터링합니다. 

 

실시간 모니터링을 위해 일정한 간격으로 데이터를 읽기 때문에 연구하는 물질 상호간의 결합특성에 대해 보다 깊이 있는 데이터를 얻을 수 있습니다.

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Ligand Live cell interaction 

리간드와 살아 있는 세포 결합특성 

LigandTracer 는 형광 또는 동위원소를 사용하기 때문에 세포를 다루는 일반 실험실에서 사용할 수 있습니다.

 

시간의 변화에 따라 결합과 해리가 어떻게 변화하는 분석하는 것은 분자 간의 상호 작용을 보다 상세하게 파악하는 방법입니다.

주요 특징

• 단백질‑세포간의 결합과 해리 과정에 대한 상호작용을 실시간으로 모니터링
• 다양한 단백질, 살아 있는 세포 사용할 수 있는 유연한 플랫폼
• 결합력 (Affinity), on/off-rate, 특이성, dose/time dependent target occupancy
• 다양한 형광 사용을 위해 검출기 교체 가능
• 사용법을 스스로 학습할 수 있는 대화형 학습 패키지 포함
• 사용하기 쉬우며 노동 시간이 절약됨
• 유지보수가 필요 없고 운영 비용이 낮음

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Ligand Tracer 계측 원리

세포의 배양

PetriDish의 한쪽에 타겟 세포를 배양하고 반대편에 Blank surface 혹은 음성세포를 배양

데이터분석

Background 시그널을 제거해주기 위해 타겟 세포 시그널 – Blank surface 시그널을 해준다.

시그널 검출

PetriDish를 장비에 장착하면 기울져 있는 상태가 된다. 형광이 표지 된 리간드 용액은 기울어져 있는 Dish의 아래쪽에 위치하고, 형광 검출기는 용액의 반대편에 위치한다. 

 

PetriDish가 회전하여 검출기에 도달하면 일정기간 동안 형광 시그널을 검출한다.

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Ligand Tracer 응용 사례

Interaction kinetics 에 대한 정보는 약물 체류 시간(drug residence time)과 적절한 약물 용량 (dose)을 이해하는데 유용합니다.

치료항체의 Binding kinetics, Affinity 분석

장비 - Ligand Tracer

타겟 - 살아 있는 종양 세포에 발현된 EGFR

항체 - Cetuximab (Erbitux)
           Trastuzumab (Herceptin)
           Pertuzumab(Perjeta)

응용 사례에 고려할 부분

• Affinity가 높고, 항체의 on(ka ), off(kd ) 속도가 느립니다.
• 장시간 결합과 해리를 모니터링해야 합니다.
• 실제로, 이러한 항체 1nM이 평형에 도달하는 시간은 10시간에서 39시간 사이입니다.

Interaction	Ka (M-1s-1)	Kd (s-1)	KD (pM)
Cetuximab EGFR	9.5 × 104	1.9 × 10-6	20
Trastuzumab HER2	1.8 × 104	7.1 × 10-6	394
Pertuzumab HER2	7.1 × 104	3.1 × 10-6	43

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Ligan Tracer Green 사양

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